biosb BSB 3669說(shuō)明書(shū)
TintoFast 細(xì)胞角蛋白 7 對(duì)冷凍丙酮固定的乳腺外佩吉特病組織的免疫組織化
| 有可能的使用 | 用于莫氏體外診斷 | |||||||||||||||||||
| 總結(jié)與說(shuō)明 | TintoFast Cytokeratin 7 (CK7) 與泌尿道和膽管上皮細(xì)胞的大多數(shù)導(dǎo)管、腺體和移行上皮細(xì)胞中的蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。CK7 區(qū)分染色陽(yáng)性的肺和乳腺上皮細(xì)胞，以及陰性的結(jié)腸和前列腺上皮細(xì)胞。 TintoFast Cytokeratin 7 還與許多良性和惡性上皮病變（例如，卵巢、乳腺和肺腺癌）發(fā)生反應(yīng)。此外，在冷凍切片中，該抗體已被證明可以標(biāo)記睪丸中的網(wǎng)狀上皮、附睪上皮以及胃和十二指腸的表面上皮。移行細(xì)胞癌為陽(yáng)性，前列腺癌為陰性。該抗體不識(shí)別中間絲蛋白，也不識(shí)別血管、結(jié)締組織等非上皮組織。 | |||||||||||||||||||
| 抗體類型 | 小鼠單克隆 | 克隆 | OV-TL 12/30 | |||||||||||||||||
| 同型 | IgG1/K | 反應(yīng)性 | 石蠟，冷凍 | |||||||||||||||||
| 本土化 | 細(xì)胞質(zhì) | 控制 | TCC、EMPD | |||||||||||||||||
| 介紹 | Anti – Cytokeratin 7 是一種小鼠單克隆抗體，來(lái)源于細(xì)胞培養(yǎng)上清液，經(jīng)過(guò)濃縮、透析、過(guò)濾滅菌并在 pH 7.5 的緩沖液中稀釋，其中含有 BSA 和疊氮化納作為防腐劑。 | |||||||||||||||||||
| 可用性 |
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莫氏冷凍組織的標(biāo)本制備
將標(biāo)本嵌入 OCT 中的低溫恒溫器內(nèi)。
在 4-5 µm 處切割切片并安裝在帶正電的載玻片上，例如 Bio SB Hydrophilic Plus 載玻片 (BSB 7028) 或 TintoDetector 蓋間隙載玻片 (BSB 7006) 的下三分之一處。
在室溫下風(fēng)干載玻片 2 分鐘，然后在培養(yǎng)箱或干浴中在 60°C 下孵育載玻片 3 分鐘。
在室溫下用丙酮或 10% NBF 固定 2 分鐘。如果使用 Bio SB Mohs ImmunoDigestor，使用 10% NBF 10% 會(huì)產(chǎn)生更好的形態(tài)。
對(duì)于固定在丙酮中的載玻片，讓它風(fēng)干。對(duì)于 NBF 中的幻燈片，用蒸餾水沖洗并風(fēng)干。
莫氏冷凍組織的預(yù)處理
將載玻片轉(zhuǎn)移到 ImmunoDNA Washer、TBST 或 PBST 緩沖液中。
使用 Mohs ImmunoDigestor 進(jìn)行 PIER、蛋白水解消化 1 分鐘。在室溫下。
用 ImmunoDNA Washer、TBST 或 PBST 緩沖液沖洗。
IHC 檢測(cè)程序
PIER 后，將載玻片轉(zhuǎn)移至 ImmunoDNA 清洗機(jī)，靜置 1-2 分鐘。
對(duì)于手動(dòng)染色，在環(huán)境溫度下進(jìn)行抗體孵育。對(duì)于自動(dòng)染色方法，請(qǐng)根據(jù)儀器制造商的說(shuō)明進(jìn)行抗體孵育。
用 ImmunoDNA 洗滌器或去離子水清洗載玻片。
繼續(xù) IHC 檢測(cè)協(xié)議。用 ImmunoDNA 洗滌液在每個(gè)步驟之間清洗載玻片。
縮寫(xiě) Mohs PolyDetector DAB HRP Brown of HRP Green 免疫組化方案
用過(guò)氧化物酶阻滯劑孵育載玻片 30 秒
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
與一抗孵育 4 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
用 HRP 標(biāo)簽孵育 3 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
準(zhǔn)備
DAB Brown（在 1ml DAB 緩沖液中加入 1 滴 DAB Chromogen；充分混合）
或 HRP Green（在 1 ml HRP Green Buffer 中加入 1 滴 HRP Green Chromogen；充分混合）
用 DAB 或 HRP Green 孵育 2 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
用蘇木精或核固紅復(fù)染 30 秒
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
使用 AquaMounter 安裝或使用 Fast ChromoProtector 使組織脫水，然后使用 PermaMounter 安裝
| 步 | Mohs PolyDetector HRP Green 或 DAB 協(xié)議 |
| 過(guò)氧化物酶阻滯劑 | 30秒 |
| 一抗 | 4分鐘。 |
| 第一步檢測(cè)（HRP 標(biāo)簽） | 3 分鐘。 |
| 底物色原 | 1-2 分鐘。 |
| 復(fù)染/蓋玻片 | 變化 |
此協(xié)議也可用于使用檸檬酸鹽或 EDTA 檢索的 FFPE 組織。
