TintoFast Synaptophysin Antibody 對(duì)冷凍丙酮固定的 Merkel 細(xì)胞癌細(xì)胞組織的免疫組織化學(xué)分析
| 有可能的使用 | 用于莫氏體外診斷 | |||||||||||||||||||||||||||
| 總結(jié)與說(shuō)明 | 突觸素是一種重 38 kDa 的突觸小泡糖蛋白。它存在于內(nèi)分泌細(xì)胞、大腦、脊髓和腎上腺中。它作為神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的標(biāo)志物。突觸素與人腎上腺髓質(zhì)、頸動(dòng)脈體、皮膚、垂體、甲狀腺、肺、胰腺和胃腸粘膜的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。在腦神經(jīng)元、脊髓、視網(wǎng)膜和胃腸道的潘氏細(xì)胞和胃壁細(xì)胞中可見(jiàn)陽(yáng)性染色。 TintoFast Synaptophysin 抗體可識(shí)別正常的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。觀察到彌漫性細(xì)顆粒細(xì)胞質(zhì)染色，這可能與神經(jīng)分泌囊泡內(nèi)的抗原分布有關(guān)。Synaptophysin 的表達(dá)與 NSE 或其他神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物的存在無(wú)關(guān)。突觸素是神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌分化的獨(dú)立廣泛標(biāo)志物。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 抗體類型 | 兔多克隆 | 克隆 | 多克隆 | |||||||||||||||||||||||||
| 同型 | IgG | 反應(yīng)性 | 石蠟，冷凍 | |||||||||||||||||||||||||
| 本土化 | 細(xì)胞質(zhì) | 控制 | 胰腺、大腦、垂體、腎上腺、結(jié)腸 | |||||||||||||||||||||||||
| 介紹 | TintoFast Synaptophysin 是一種兔多克隆抗體，來(lái)源于細(xì)胞培養(yǎng)上清液，經(jīng)過(guò)濃縮、透析、過(guò)濾滅菌并在 pH 7.5 的緩沖液中稀釋，其中含有 BSA 和疊氮化納作為防腐劑。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 可用性 |
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莫氏冷凍組織的標(biāo)本制備
將標(biāo)本嵌入 OCT 中的低溫恒溫器內(nèi)。
在 4-5 µm 處切割切片并安裝在帶正電的載玻片上，例如 Bio SB Hydrophilic Plus 載玻片 (BSB 7028) 或 TintoDetector 蓋間隙載玻片 (BSB 7006) 的下三分之一處。
在室溫下風(fēng)干載玻片 2 分鐘，然后在培養(yǎng)箱或干浴中在 60°C 下孵育載玻片 3 分鐘。
在室溫下用丙酮固定 2 分鐘，然后讓載玻片風(fēng)干。
莫氏冷凍組織的預(yù)處理
將 TintoDetector 培養(yǎng)箱預(yù)熱至 110 °C。
將 TintoDetector Cap Gap 載玻片 (BSB 7006) 面對(duì)面放置，然后將它們插入 TintoDetector 載玻片支架 (BSB 7003)。
將載玻片浸入含 EDTA 的 ImmunoDNA Retriever 中，通過(guò)毛細(xì)作用提取足夠的溶液以覆蓋組織。
在預(yù)熱的 TintoDetector 培養(yǎng)箱中加熱載玻片 3 分鐘。
將載玻片轉(zhuǎn)移至室溫并冷卻 1 分鐘。
莫氏 IHC 檢測(cè)
HIER 后，將載玻片轉(zhuǎn)移到 ImmunoDNA 清洗機(jī)，靜置 1-2 分鐘。
對(duì)于手動(dòng)染色，在環(huán)境溫度下進(jìn)行抗體孵育。對(duì)于自動(dòng)染色方法，請(qǐng)根據(jù)儀器制造商的說(shuō)明進(jìn)行抗體孵育。
用 ImmunoDNA 洗滌器或去離子水清洗載玻片。
繼續(xù) IHC 檢測(cè)協(xié)議。用 ImmunoDNA 洗滌液在每個(gè)步驟之間清洗載玻片。
HRP Green 免疫組化方案的縮寫(xiě) Mohs PolyDetector Plus DAB HRP Brown
與一抗孵育 5 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
用 M/R 鏈接孵育 4 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
HRP 標(biāo)簽 4 分鐘。
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
準(zhǔn)備
DAB Brown（在 1ml DAB 緩沖液中加入 1 滴 DAB Chromogen；充分混合）
或 HRP Green（在 1 ml HRP Green Buffer 中加入 1 滴 HRP Green Chromogen；充分混合）
用 DAB 或 HRP Green 孵育 1-2 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
用蘇木精或核固紅復(fù)染 30 秒
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
使用 AquaMounter 安裝或使用 Fast ChromoProtector 使組織脫水，然后使用 PermaMounter 安裝
| 步 | Mohs PolyDetector HRP Green 或 DAB 20 分鐘協(xié)議 |
| 希爾 | 3 分鐘。 |
| 一抗 | 5分鐘。 |
| 第一步檢測(cè) | 4分鐘。 |
| 第二步檢測(cè) | 4分鐘。 |
| 底物色原 | 1-2 分鐘。 |
| 復(fù)染/蓋玻片 | 變化 |
此協(xié)議也可用于使用檸檬酸鹽或 EDTA 檢索的 FFPE 組織。
