加熱和運(yùn)行DNA去除試劑盒
可以預(yù)期 RNA 完整性的一些損失。因此，不建議在 qPCR 設(shè)置之外使用試劑盒。
根據(jù) qPCR 指導(dǎo)原則設(shè)計(jì)引物。
確保 RNA 和反應(yīng)緩沖液在混合前冰冷。
HL-dsDNase 消化含有終 Mg2+ 因此，RT 反應(yīng)中鎂的殘留必須為
考慮。如果使用 10µl 消化的 RNA，20µl RT 反應(yīng)中的鎂濃度將增加 1.5 mM。
如果用于下游 cDNA 合成的 RT 試劑盒與額外的鎂不相容，則可實(shí)施以下步驟：
使用較小部分經(jīng) DNase 處理的 RNA 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄
Nase 處理（多 50µl）。考慮 Mg2+ 將存在于剩余 RNA 中，這可能影響其長(zhǎng)期穩(wěn)定性。
如果 RNA 的體積超過(guò) 20µl，可能有利于將 HL-dsDNase 的量加倍。
反轉(zhuǎn)錄前避免將去污的 RNA 和引物預(yù)熱到 60 ℃ 以上。
ArcticZymes 的 Heat&Run gDNA removal kit 預(yù)期用于從高質(zhì)量 RNA 中去除 gDNA，用于 qPCR。RNA 濃度 > 50 ng/
推薦使用 µl。該試劑盒基于 ArcticZymes 公司的熱不穩(wěn)定雙鏈特異性 dna 酶（HL-dsdna 酶）。DNase 處理后，HL-dsDNase 很容易被溫度的適度升高 (58 ℃) 滅活。gDNA 去除和逆轉(zhuǎn)錄可以在同一管中進(jìn)行，從而大限度地減少移液步驟，減少動(dòng)手時(shí)間。
HL-dsDNase 是來(lái)自北極蝦的 dsDNase 的突變版本。HL-dsDNase 在非動(dòng)物宿主（酵母）中重組表達(dá)。
80200-50：HL-dsDNase（1 瓶）和 10x 反應(yīng)緩沖液（2 瓶），足以進(jìn)行 50 次反應(yīng)。
參見(jiàn)標(biāo)簽。
儲(chǔ)存
Store at -20 °C 下儲(chǔ)存。建議等分反應(yīng)緩沖液，以避免反復(fù)凍融循環(huán)。
保持反應(yīng)緩沖液冷卻。
樣品材料
HL-dsDNase 適用于任何來(lái)源 RNA 的去污。該試劑盒與 RNase 抑制劑相容。EDTA 和高鹽濃度會(huì)降低 HL-dsDNase 的活性。
檢測(cè)試劑盒內(nèi)容物是否存在 RNase。
方案
設(shè)置加熱和運(yùn)行反應(yīng)，如下所示：
注：如果預(yù)期使用同管逆轉(zhuǎn)錄，確保 HL-dsDNase 反應(yīng)的總體積不超過(guò) RT-kit 的大輸入限值。
注：也可在 25 ℃ 孵育 20 min。
注：將您選擇的 RT 試劑直接加入 HL-dsDNase 反應(yīng)混合物中。
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