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    laebio K007說明書

     更新時(shí)間:2019-03-03 點(diǎn)擊量:1898

     

    laebio K007說明書

     

    Sumoylation Control Kits 
    Catalog # K007 supplied with proteins

     

    描述:
    該檢測(cè)試劑盒含有用于常規(guī)檢測(cè)SUMO化活性的試劑。包括Sumoylation標(biāo)記(人拓?fù)洚悩?gòu)酶I蛋白)以允許清楚地檢測(cè)反應(yīng)。已經(jīng)證明該測(cè)定法適用于粗提物。強(qiáng)烈建議將人類EI,活性物質(zhì)(Cat#P001; P006),人類E II,活性物質(zhì)(Cat#P002; P011)和人類SUMO I,活性物質(zhì)(Cat#P003; P012)與此試劑盒一起使用。

    K007套件包含:

    • SAE I和SAE II(人類EI)(Cat#P006)
    • UBC9(人類E II)(Cat#P011)
    • SUMO I(活動(dòng)形式)。(Cat#P012)
    • 人DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I片段。(Cat#B007)
    • 抗拓?fù)洚悩?gòu)酶I抗體。(Cat#AP006)(凍干的抗體應(yīng)在使用前用100ul H 2 O 重構(gòu)。)
    • 10X的SUMO化反應(yīng)緩沖液。(Cat#B006)(10x緩沖液含有200mM Hepes pH 7.5,50mM MgCl 2和20mM ATP。)

    上述試劑適用于50次SUMO化反應(yīng)。

     

    測(cè)定條件:
    SUMO化測(cè)定在20微升的終體積中含有20mM的Hepes pH為7.5,5mM的氯化鎂反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行2,2mM的ATP。我們建議添加新鮮的2mM ATP以確保提供足夠的能量。

    拓?fù)洚悩?gòu)酶I Sumoylation Control Protocol:

    1. 加入2ul 50kd拓?fù)洚悩?gòu)酶I片段(Cat#B007)作為每個(gè)反應(yīng)的底物。
    2. 在每個(gè)反應(yīng)中,首先向底物中加入2ul E2,然后加入2ul Sumo-1,2ul 10x反應(yīng)緩沖液(Cat#B006),2ul E1和2μl20mMATP。后,加入H 2 O使總體積達(dá)到20μl 。
    3. LAE SUMO化蛋白的宜反應(yīng)濃度如下:
      • EI:7.5ug / ml
      • E II:50ug / ml
      • SUMO-1:50ug / ml
            為對(duì)照測(cè)定的推薦條件是37 ø 30?60分鐘c。。
       
    4. 在10 ml(Cat#AP006)中使用1000倍稀釋的提供的拓?fù)洚悩?gòu)酶I抗體進(jìn)行免疫印跡。應(yīng)檢測(cè)四個(gè)主要的sumoylated波段。

    使用Topo-1抗體(cat#AP006)的SUMO化 50Kd Topo-1蛋白(cat#B007)的Western印跡(12.5%凝膠)。泳道1:sumoylated 50Kd Topo-I片段; 泳道2:未經(jīng)過?;?0Kd Topo-I片段。

    Topo-1抗體( Cat#AP006)可檢測(cè)至少四個(gè)主要的SUMO化Topo-1片段 。

     

    Sumoylation Protocol:

    1. 準(zhǔn)備合適的純化底物蛋白。
    2. 在每個(gè)反應(yīng)中,首先向底物中加入2μlE2,然后加入2μlSy,2μl10μl反應(yīng)緩沖液,2μlE1和2μl20mMATP。后,加入H 2 O使終體積達(dá)到20μl。
    3. LAE蛋白的宜反應(yīng)濃度如下:
      • EI:7.5ug / ml
      • E II:50ug / ml
      • SUMO-1:50ug / ml

     

    運(yùn)輸/儲(chǔ)存:
    此套件隨附干冰,應(yīng)儲(chǔ)存在-70 o C或更低溫度。  

    法律考慮:僅供研究使用。

     

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    laebio K007說明書

     

    Sumoylation Control Kits 
    Catalog # K007 supplied with proteins

     

    描述:
    該檢測(cè)試劑盒含有用于常規(guī)檢測(cè)SUMO化活性的試劑。包括Sumoylation標(biāo)記(人拓?fù)洚悩?gòu)酶I蛋白)以允許清楚地檢測(cè)反應(yīng)。已經(jīng)證明該測(cè)定法適用于粗提物。強(qiáng)烈建議將人類EI,活性物質(zhì)(Cat#P001; P006),人類E II,活性物質(zhì)(Cat#P002; P011)和人類SUMO I,活性物質(zhì)(Cat#P003; P012)與此試劑盒一起使用。

    K007套件包含:

    • SAE I和SAE II(人類EI)(Cat#P006)
    • UBC9(人類E II)(Cat#P011)
    • SUMO I(活動(dòng)形式)。(Cat#P012)
    • 人DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I片段。(Cat#B007)
    • 抗拓?fù)洚悩?gòu)酶I抗體。(Cat#AP006)(凍干的抗體應(yīng)在使用前用100ul H 2 O 重構(gòu)。)
    • 10X的SUMO化反應(yīng)緩沖液。(Cat#B006)(10x緩沖液含有200mM Hepes pH 7.5,50mM MgCl 2和20mM ATP。)

    上述試劑適用于50次SUMO化反應(yīng)。

     

    測(cè)定條件:
    SUMO化測(cè)定在20微升的終體積中含有20mM的Hepes pH為7.5,5mM的氯化鎂反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行2,2mM的ATP。我們建議添加新鮮的2mM ATP以確保提供足夠的能量。

    拓?fù)洚悩?gòu)酶I Sumoylation Control Protocol:

    1. 加入2ul 50kd拓?fù)洚悩?gòu)酶I片段(Cat#B007)作為每個(gè)反應(yīng)的底物。
    2. 在每個(gè)反應(yīng)中,首先向底物中加入2ul E2,然后加入2ul Sumo-1,2ul 10x反應(yīng)緩沖液(Cat#B006),2ul E1和2μl20mMATP。后,加入H 2 O使總體積達(dá)到20μl 。
    3. LAE SUMO化蛋白的宜反應(yīng)濃度如下:
      • EI:7.5ug / ml
      • E II:50ug / ml
      • SUMO-1:50ug / ml
            為對(duì)照測(cè)定的推薦條件是37 ø 30?60分鐘c。。
       
    4. 在10 ml(Cat#AP006)中使用1000倍稀釋的提供的拓?fù)洚悩?gòu)酶I抗體進(jìn)行免疫印跡。應(yīng)檢測(cè)四個(gè)主要的sumoylated波段。

    使用Topo-1抗體(cat#AP006)的SUMO化 50Kd Topo-1蛋白(cat#B007)的Western印跡(12.5%凝膠)。泳道1:sumoylated 50Kd Topo-I片段; 泳道2:未經(jīng)過酰化的50Kd Topo-I片段。

    Topo-1抗體( Cat#AP006)可檢測(cè)至少四個(gè)主要的SUMO化Topo-1片段 。

     

    Sumoylation Protocol:

    1. 準(zhǔn)備合適的純化底物蛋白。
    2. 在每個(gè)反應(yīng)中,首先向底物中加入2μlE2,然后加入2μlSy,2μl10μl反應(yīng)緩沖液,2μlE1和2μl20mMATP。后,加入H 2 O使終體積達(dá)到20μl。
    3. LAE蛋白的宜反應(yīng)濃度如下:
      • EI:7.5ug / ml
      • E II:50ug / ml
      • SUMO-1:50ug / ml

     

    運(yùn)輸/儲(chǔ)存:
    此套件隨附干冰,應(yīng)儲(chǔ)存在-70 o C或更低溫度。  

    法律考慮:僅供研究使用。